A Drosophila melanogaster p53 sumoilációjának molekuláris biológiai és genetikai vizsgálata

Pardi Norbert
A Drosophila melanogaster p53 sumoilációjának molekuláris biológiai és genetikai vizsgálata.
Doktori értekezés, Szegedi Tudományegyetem (2000-).
(2011) (Kéziratban)

[thumbnail of PardiNorberttézis.pdf]
Előnézet
PDF (disszertáció)
Download (2MB)
[thumbnail of TézisfüzetmagyarPN.pdf]
Előnézet
PDF (tézisfüzet)
Download (191kB)
[thumbnail of TézisfüzetangolPN.pdf]
Előnézet
PDF (tézisfüzet)
Download (119kB)

Magyar nyelvű absztrakt

A p53 egyike a legismertebb tumor szupresszoroknak. Számos ráktípusban (vastagbél, tüdő, emlő, nyelőcső, máj, húgyhólyag, petefészek, agy) ezen gén mutációját is kimutatták. Az is nagyon gyakori, hogy nem a p53-ban bekövetkező mutáció vezet tumorok kialakulásához, hanem a p53 aktiválódási útvonalában történik hiba. Az aktiválódott p53 képes gátolni a sejtciklust, vagy apoptózist tud előidézni, és fontos szerepet játszik a sejtdifferenciálódás indukciójában is. Kimutatták, hogy a vad típusú p53 gátolja az érképződést tumorokban az új véredények képzésében részt vevő gének szabályzásával. A p53 sejtciklus gátló funkciója a fehérje transzkripciós faktorként történő működésén keresztül valósul meg. A p53 számos apoptotikus gén transzkripciós aktiválására is képes. Az ezredfordulón azonosították a p53 tumor szupresszor Drosophila melanogaster ortológját. A humán és az ecetmuslica fehérje számos hasonló funkcióval rendelkezik, tehát úgy tűnik, hogy a p53-mal kapcsolatos jelátviteli útvonalak - legalább részben - konzerváltak. Mivel a p53 egy nagyon fontos fehérje, minden róla kapott információ érdekes lehet. A rendelkezésünkre álló ecetmuslica - mint soksejtű modellorganizmus - kiváló lehetőséget teremt a fehérje részletes biokémiai és genetikai vizsgálatához. Munkám kezdeti szakaszában Dmp53 kölcsönható fehérjéket azonosítottam Drosophila embrionális cDNS könyvtáron végrehajtott nagyléptékű szűréssel. Ezek közt Dmp53-mal interakcióba lépő fehérjeként azonosítottam a sumoilációban szerepet játszó enzimeket is. Dolgozatomban a Dmp53 SUMO-módosításával kapcsolatos kérdésekre keresem a választ. Élesztő két-hibrid módszer segítségével kimutattam, hogy a Dmp53 C-terminális doménje vesz részt a sumoilációban szerepet játszó fehérjékkel kialakított kölcsönhatásban. A Dmp53 szekvenciájában egy olyan helyet találtam, amely tökéletesen megfelel a konszenzus sumoilációs szekvenciának. Ennek a helynek a megváltoztatása nem befolyásolja a vizsgált kölcsönhatásokat, és a fehérje továbbra is kötődik a sumoilációs enzimekhez. Megvizsgáltam, hogy a Dmp53 és a SUMO módosításban részt vevő fehérjéket kódoló gének között genetikai kölcsönhatást ki tudok-e mutatni. Azt az eredményt kaptam, hogy a sumoiláció hiánya, vagy csökkent mértékű megvalósulása csökkenti a Dmp53 DNS károsodások kijavítását biztosító aktivitását. A Dmp53 további in vivo vizsgálatához transzgenikus állatokat hoztam létre.Vizsgálataim során azt szerettem volna megtudni, hogy a fehérjét túltermelve látok-e fenotípus különbséget a vad típusú, illetve mutáns Dmp53-at expresszáló állatok között. Akár a 2., akár a 3. kromoszómás mutáns Dmp53-at termelő törzset használtam, súlyosabb fenotípusokat kaptam, mint a vad típusú fehérjét expresszáló törzsnél. Továbbhaladva, Western analízissel ellenőriztem transzgenikus muslicáinkban a Dmp53 mennyiségét. Azt tapasztaltam, hogy a pontmutáns fehérjét túltermelő random inszertálódott transzgént tartalmazó állatokban a fehérje stabilizálódik, és nagy mennyiségben van jelen, sokkal több van belőle, mint a vad típusút expresszáló társaikban. Ugyanezen mintákból megpróbáltam a Dmp53 SUMO-módosított formáját is kimutatni, de nem jártam sikerrel. A sumoiláció kimutatásának általánosan használt módszere annak transzfektált sejtekben történő detektálása. Ezért megpróbáltam a SUMO-módosítás S2 sejtekben történő kimutatását. Bár a fehérjét sikerült túltermelni - SUMO-módosított Dmp53 frakciót nem tudtam detektálni. A sumoiláció számos jól jellemzett biológia funkcióval rendelkezik. Ismert, hogy bizonyos fehérjék sumoilált, illetve módosítatlan formája különböző sejten belüli elhelyezkedést mutat, tehát a sumoiláció/desumoiláció szükséges a fehérje citoplazma és sejtmag közötti transzportjához. Immunfestést alkalmazva Drosophila szöveteken azt tapasztaltam,hogy a Dmp53 fehérje vad típusú, illetve mutáns formája is, a sejtmagban helyezkedik el, ami azt mutatja, hogy a fehérje transzportját a SUMO-módosítás nem, vagy nem önmagában befolyásolja. A sumoiláció egyik jól ismert hatása, hogy a célfehérje transzkripciós aktivitását képes módosítani. Kísérleteimben nem találtam lényeges különbséget a vad típusú és mutáns fehérje transzkripcióra kifejtett hatásában.

Mű típusa: Disszertáció (Doktori értekezés)
Publikációban használt név: Pardi Norbert
Idegen nyelvű cím: Molecular biological and genetic study of the sumoylation of Drosophila melanogaster p53
Témavezető(k):
Témavezető neve
Beosztás, tudományos fokozat, intézmény
MTMT szerző azonosító
Boros Imre
egyetemi tanár
NEM RÉSZLETEZETT
Szakterület: 01. Természettudományok > 01.06. Biológiai tudományok
Doktori iskola: Biológia Doktori Iskola
Tudományterület / tudományág: Természettudományok > Biológiai tudományok
Nyelv: magyar
Védés dátuma: 2011. április 19.
EPrint azonosító (ID): 694
A mű MTMT azonosítója: 2774813
doi: https://doi.org/10.14232/phd.694
A feltöltés ideje: 2011. márc. 01. 09:17
Utolsó módosítás: 2019. júl. 15. 14:49
Raktári szám: B 4857
URI: https://doktori.bibl.u-szeged.hu/id/eprint/694
Védés állapota: védett

Actions (login required)

Tétel nézet Tétel nézet

Letöltések

Letöltések havi bontásban az elmúlt egy évben

Year
ápr 20246
máj 20247
jún 20245
júl 20243
aug 20242
szept 20244
okt 20241
nov 20245
dec 20244
jan 20256
feb 20258
márc 202520
ápr 20250