Innovative approach for the application of MTT, LDH and bis-ANS: ex vivo modelling of the extracellular beta-amyloid precipitation

Előnézet	PDF (disszertáció) Download (10MB) | Előnézet
Előnézet	PDF (tézisfüzet) Download (519kB) | Előnézet
Előnézet	PDF (tézisfüzet) Download (526kB) | Előnézet

Magyar nyelvű absztrakt

z akut hippokampális agyszeleteken alapuló modellek alkalmas eszközei az AK-ra jellemző, a hippokampusz működését befolyásoló pathomechanizmusok mélyebb megértésének, különs tekintettel az Aβ oligomerizációra. Így kövezik ki a különböző hipotézisek vagy potenciális védőanyagok teszetléséhez vezető utat, valamint az in vivo megfigyelt jelenségek és az in silico predikciók validálását is lehetővé teszik. Annak érdekében, hogy az in vitro és in vivo metodikák néhány közismert hátrányait kiküszöböljük, kifejlesztettünk egy egyszerű és gazdaságos szerkezetet, amelyet ExViS-nek neveztünk el (Ex Vivo System; univerzális minikamra rendszer) és amely képes életben tartani az akut szövetszeleteket. A rendszer megkönnyítette és lehetővé tette további akut (ex vivo) hippokampális agyszeleteken alapuló technikák fejlesztését, hogy az AK-ra jellemző egyes patomechanizmusokat modellezni tudjuk. PhD tanulmányaim során az alábbi akut hippokampális agyszeleteken alapuló metodikákat és ex vivo modelleket dolgoztuk ki: 1. Az Aβ1-42 aggregátumok (pl. oligmerek) toxicitásának gyors, megbízható és kvantitatív meghatározása öregedő (OGD) akut hippokampális szelet-modellen MTT és LDH tesztek alkalmazásával; 2. A Zn2+ által előidézett Aβ1-42 oligomerizáció toxikus hatásának kvantitatív meghatározása akut hippokampális szeleteken MTT teszttel; 3. Részletgazdag fluoreszcens képalkotás a neuronok nyúlványkeresztmetszeteiről és nyúlvány-hálózatáról akut hippokampális agyszeleteken a bis-ANS újszerű alkalmazásával és annak együttfestési variációival; 4. A glutamáterg szinapszisokban felszabaduló Zn2+ hatása az Aβ1-42 aggregációjára és a jelenség sejtéletképességre, tanulásra és memóriára (pl. LTP) gyakorolt hatásának modellezése akut hippokampális agyszeleteken.

Absztrakt (kivonat) idegen nyelven

The acute hippocampus slice-based models can serve as a feasible tool to gain deeper understanding on how pathological events in AD, in particular Aβ oligomerization, influence hippocampal functionality and therefore paving the way to develop and test related hypothesis but also to screen potential protective agents or validate results seen in vivo or predicted in silico. To overcome the shortcomings of the in vitro and in vivo methods, we developed a cost effective and simple apparatus for maintaining the viability of acute tissue slices, named: ExViS (Ex Vivo System; Universal Mini-Chamber Tube System for Acute Tissue Slices). The system allowed us to further develop methods that use acute (ex vivo) hippocampal slices to model AD-related patomechanisms. Over the course of my PhD studies we have developed the following techniques and ex vivo models based on the features of acute hippocampal slices: 1. Rapid, reliable and quantitative determination of Aβ1-42 toxicity in ageing (OGD) acute hippocampal slice model using MTT and LDH assays. 2. Quantitative determination of zinc-induced Aβ1-42 oligomerization toxicity in acute hippocampal slice model using MTT assay. 3. Fluorescent imaging of neurite cross-sections and detailed imaging of neurite structures in acute hippocampal slices via a novel application of bis-ANS and its co-staining variations. 4. Modelling the effect of Zn2+ released in glutamergic synaptic cleft in the hippocampus on Aβ1-42 aggregation and its consequences on cell viability and synaptic functionality, learning and memory (LTP).

Tétel nézet