Candida parapsilosis szekretált aszpartil proteinázok virulenciában betöltött szerepének vizsgálata

Horváth Péter Ferenc
Candida parapsilosis szekretált aszpartil proteinázok virulenciában betöltött szerepének vizsgálata.
PhD, University of Szeged.
(2014)

[img]
Preview
PDF (disszertáció)
Download (10MB) | Preview
[img]
Preview
PDF (tézis)
Download (278kB) | Preview
[img]
Preview
PDF (melléklet)
Download (280kB) | Preview
[img]
Preview
PDF (tézis)
Download (408kB) | Preview

Abstract in Hungarian

A Candida fajok által kiváltott megbetegedések az elmúlt három évtized során egyre növekvő egészségügyi problémát jelentenek.Bár ezen élesztők többsége a normál, humán mikroflóra része, bizonyos körülmények között a bőrt, nyálkahártyát, vagy az egész szervezetet érintő, szisztémás fertőzés kiváltására képesek. Epidemiológiai vizsgálatok szerint, a felnőtt lakosság körében a kandidiázisos esetek legnagyobb hányadát a C. albicans okozza, azonban újszülöttek körében a kandidiázisos kórképek kialakulásáért felelős ágensek körében a C. parapsilosis sok esetben a C. albicans által kiváltott esetszámot is felülmúlja. Bár az ezredforduló óta a nem-albicans fajok (újszülöttek körében főként a C. parapsilosis) által okozott megbetegedések aránya növekvő tendenciát mutat, azok patomechanizmusáról, virulencia faktorairól kevés ismeret áll rendelkezésünkre. C. parapsilosis által kiváltott fertőzések esetén jelentős szerep jut a mikroba által szekretált hidrolitikus enzimeknek, főként a lipázoknak és szekretált aszpartil proteinázoknak. Szekretált aszpartil proteinázok esetén a C. parapsilosis két fő proteinázának, a Sapp1 és Sapp2 fehérjék enzimológiai tisztítása és jellemzése történt meg,ám azok virulenciában betöltött szerepe eddig nem tisztázott. A mikroorganizmus SAPP3 génjét ezidáig mint putatív szekvenciát tartják számon. Továbbá, bár C. parapsilosis esetén napjainkra számos géndeléciós módszer elérhető, azonban C. albicans-al ellentétben overexpressziós módszer ezen mikroba esetén nem áll rendelkezésre. Munkánk során sikeresen előállítottuk a Candida parapsilosis SAPP génjeire deléciós mutáns törzseket. Vizsgálataink során bebizonyítottuk, hogy a Candida parapsilosis fő szekretált proteinázának, a Sapp1 fehérjének jelentős szerepe van a mikroba szérumban való túlélésében, valamint a fagocitózis gátlásában. Bár ezen fehérjének jelentős szerep jut a mikroba fagocita sejten belüli túlélésében, ám a Sapp negatív törzs vizsgálata rávilágított, hogy az intracelluláris túlélés során jelentős szerep jut a további szekretált aszpartil proteináz fehérjéknek is. Sejtfalösszetétel vizsgálataink rámutattak, hogy a Sapp negatív törzs sejtfalában található kitin tartalom jelentősen lecsökkent, míg a glükán tartalom jelentősen megemelkedett a vad típusútörzshöz képest. Ez az eredmény jól mutatja, hogy a szekretált aszpartil proteinázok nem csak mint virulencia faktorok fontosak, de a mikroba sejtfalintegritásának fenntartásában is jelentős szereppel bírnak. Munkánk során kidolgoztunk továbbá egy C. parapsilosis-ra optimalizált gén overexpressziós rendszert is. Ennek során a C. parapsilosis CLIB 214 leucin auxotróf törszének RP10 régiójába integráltuk a C. albicans RP10 lokuszát. Annak kiderítésére, hogy ezen létrehozott fogadó törzs képes-e működtetni a majdani overexpressziós vektorokat a a Clp10-caTDH3-GFP vektor leucin auxotrófia markert hordozó változatát a létrehozott fogadó törzs C. albicans RP10 régiójába integráltuk. A transzformáns telepek összes sejtje GFP pozitív volt, amely jól demonstrálja, hogy a C. parapsilosis is képes a TDH3 promoter által szabályozott gének működtetésére. Az overexpressziós vektorok rövid időn belüli létrehozásához a gateway klónozási rendszert alkalmaztuk. Az első, gateway klónozással előállított overexpressziós vektorunk a WOR1 gént hordozó pTDH3-GTW-LEU2 destination vektor. A WOR1 gén C. albicans béli ortológjáról kimutatták, hogy a white-opaque átmenetben játszik fontos szerepet. Az elkészített destination vektor C. albicans RP10 régióját hordozó C. parapsilosis törzsbe történő transzformációját követően, a transzformánsok qRT-PCR vizsgála a WOR1 gén expressziójában bekövetkezett mintegy tízszeres overexpressziót mutattak. Ez az eredmény jól mutatja, hogy az alkalmazott rendszer eredményesen használható C. parapsilosis gének túlműködtetésére, ezáltal új utat nyit meg a mikroba génjeinek tanulmányozására. A rendszer előnye, hogy a deléciós módszerekkel összevetve jóval rövidebb idő alatt létrehozhatók az overexpressziós mutáns törzsek, így rövid időn belül nagy számú gén vizsgálata (akár a C. parapsilosis teljes ORF-om) válik lehetségessé.

Item Type: Thesis (PhD)
Creators: Horváth Péter Ferenc
Hungarian title label: Candida parapsilosis szekretált aszpartil proteinázok virulenciában betöltött szerepének vizsgálata
Title of the thesis in foreign language: The role of Candida parapsilosis secreted aspartyl proteinases in host-pathogen interactions
Divisions: Doctoral School of Biology
Discipline label: természettudományok > biológiai tudományok
Defence date label: 2014. May 12.
Supervisor label:
SupervisorSupervisor scientific name labelEmail
Dr. Gácser AttilaTudományos főmunkatárs, Habil.,PhD, SZTE-TTIK Mikrobiológiai Tanszékgacsera@gmail.com
Reviewer label:
Reviewer name labelReviewer scientific name labelEmail
Dr. Nagy Istváncsoportvezető - BAY-BIO Metagenomikai Osztály, PhD, Bay Zoltán alkalmazott kutatási Közhasznú Nonprofit Kft.nagyi@baygen.hu
Dr. Majoros Lászlóegyetemi docens, PhD, MD, Debreceni Egyetem Orvosi Mikrobiológiai Intézetmajor@med.unideb.hu
President label:
President name labelPresident scientific name labelEmail
Dr. Fekete Évaprofessor emerita, az MTA doktora, SZTE TTIK Élettani, Szervezettani és Idegtudományi Tanszékefekete@bio.u-szeged.hu
Member label:
Member name labelMember scientific name labelEmail
Dr. Bodai Lászlóadjunktus, Ph.D., SZTE TTIK Biokémiai és Molekuláris Biológiai Tanszékbodai@bio.u-szeged.hu
Dr. Nyilasi Ildikótudományos munkatárs, Ph.D., SZTE TTIK Mikrobiológiai Tanszéknyilasiildi@freemail.hu
Item ID: 2183
Identification Number: [1844448]
doi: https://doi.org/10.14232/phd.2183
Date Deposited: 2014. Apr. 16. 15:46
Last Modified: 2017. Jun. 23. 16:20
Depository no.: B 5701
Supervisor: Dr. Gácser Attila
Supervisor scientific name label: Tudományos főmunkatárs, Habil.,PhD, SZTE-TTIK Mikrobiológiai Tanszék
URI: http://doktori.bibl.u-szeged.hu/id/eprint/2183
Defence/Citable status: Defended.

Actions (login required)

View Item View Item

Downloads

Downloads per month over past year